主要功能用途
7500 Fast實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀具有5色熒光檢測(cè)通道和96孔快速升降溫模塊。支持常規(guī)單重(Singleplex qPCR)、多重?zé)晒舛糠治觯∕ultiplexing qPCR)和快速PCR檢測(cè)。
主要應(yīng)用包括:
1、基因表達(dá)分析
動(dòng)植物和微生物在生理病理、環(huán)境及外來(lái)脅迫下相關(guān)基因表達(dá)的變化分析以及SiRNA誘導(dǎo)基因沉默和基因敲除后特定基因表達(dá)水平的檢測(cè)。
2、miRNA表達(dá)水平的檢測(cè)
基于miRNA與特定靶基因mRNA表達(dá)水平變化間的關(guān)聯(lián),研究miRNA 調(diào)控基因表達(dá)機(jī)制。
3、基因分型(SNP genotyping)
利用TaqMan探針、飽和DNA染料HRM曲線分析進(jìn)行基因分型,得出等位基因頻率、基因型占總基因型比率等。可應(yīng)用于如遺傳病診斷,SNP基因分型,藥物代謝酶DME基因分型,法醫(yī)遺傳學(xué)鑒定等。
4、拷貝數(shù)變異(CNV)
拷貝數(shù)變異(Copy number variation, CNV)是指因基因組發(fā)生重排而導(dǎo)致長(zhǎng)度1KB以上的基因片段的缺失(減少)、插入、重復(fù)(增加)、重排、倒 位、DNA 拷貝數(shù)目變化,也稱為拷貝數(shù)多態(tài)性(copy number polymorphisms, CNPs)。是造成物種個(gè)體差異和人類許多疾病(如癌癥、遺傳性疾病、心血管疾病)的一種重要遺傳基礎(chǔ)。熒光實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)初始樣品的某個(gè)DNA 片段的拷貝數(shù)進(jìn)行定量,用已知拷貝數(shù)為2的DNA內(nèi)參校正而實(shí)現(xiàn)對(duì)目DNA 片段拷貝數(shù)的確認(rèn)。
5、高分辨率溶解曲線分析(High resolution melt, HRM)
DNA序列長(zhǎng)度、GC 含量及堿基互補(bǔ)性差異影響DNA雙鏈結(jié)構(gòu)的熱穩(wěn)定性。高分辨熔解曲線(high-resolution melt,HRM) 分析是通過(guò)實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)升溫過(guò)程中與雙鏈DNA特異性結(jié)合的熒光染料釋放的綠色熒光強(qiáng)度的變化,了解PCR 產(chǎn)物中DNA分子的解鏈溫度情況,分析樣品特定基因片段DNA組成變化。實(shí)時(shí)熒光定量PCR實(shí)驗(yàn)運(yùn)行程序中引入溶解曲線分析環(huán)節(jié)后,可借助于專用HRM分析模塊完成HRM分析。HRM用于突變掃描和基因分型,不受突變堿基位點(diǎn)和種類限制,既可對(duì)未知突變進(jìn)行篩查、掃描,又能對(duì)已知突變進(jìn)行分析,還可用于STR分析。
6、病原體檢測(cè)(Pathogen detection)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀能可靠用于臨床醫(yī)學(xué)人體上呼吸道的感染、肺炎、消化道感染、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等疾病,以及畜牧業(yè)、農(nóng)作物病蟲(chóng)害的病原體的檢測(cè)確認(rèn)、感染嚴(yán)重程度的量化評(píng)估。
7、蛋白熱穩(wěn)定性分析(Protein thermal shift)
利用實(shí)時(shí)定量PCR儀來(lái)分析熱穩(wěn)定性,進(jìn)行配體-蛋白結(jié)合的高通量篩選,突變或修飾對(duì)蛋白熱穩(wěn)定性的影響
使用蛋白結(jié)合染料(如Protein Thermal Shift 染料),實(shí)時(shí)定量PCR系統(tǒng)上運(yùn)行實(shí)時(shí)熔解實(shí)驗(yàn),根據(jù)因蛋白熔解導(dǎo)致熒光圖像差異,分析配體與蛋白的結(jié)合穩(wěn)定性。可用于以高通量篩選配體與蛋白的結(jié)合, 篩選能與蛋白靶點(diǎn)結(jié)合的小分子和片段文庫(kù)候選藥物、抗體,鑒定最佳緩沖液條件以改善蛋白的純化和分離等。
8、食品安全和GMO(genetically modified organism)檢測(cè)
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)用于食品的微生物污染監(jiān)測(cè)、肉食類食品食材來(lái)源和組成的檢驗(yàn)、如轉(zhuǎn)基因動(dòng)植物基因的檢測(cè)等。
9、耐藥基因檢測(cè)
性能特點(diǎn)
7500 Fast實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀采用的快速加熱塊,可在極速運(yùn)行時(shí)保證熱均一性。快速變溫循環(huán)方式,可在短短30分鐘內(nèi)得到高質(zhì)量實(shí)驗(yàn)結(jié)果;
1、5色熒光檢測(cè)通道完美支持多重實(shí)時(shí)定量分析
7500 Fast系統(tǒng)配置有熒光激發(fā)濾片、檢測(cè)濾片優(yōu)化固定組合的5個(gè)熒光檢測(cè)通道,經(jīng)出廠校準(zhǔn)的染料包括:FAM/SYBR Green I、VIC/JOE、NED/ TAMRA/Cy3、ROX/Texas Red 和 Cy5 染料,能夠在單個(gè)反應(yīng)孔中同時(shí)進(jìn)行多個(gè)靶標(biāo)的同步檢測(cè)。
2、支持快速反應(yīng)檢測(cè)
7500 Fast實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀使用獨(dú)特設(shè)計(jì)的熱循環(huán)模塊,可在極速運(yùn)行時(shí)保證反應(yīng)模塊溫度的均一性。
配合TaqMan Fast Universal PCR Master Mix和Fast SYBGreen Master Mix預(yù)混液和快速光學(xué)反應(yīng)板,在不影響擴(kuò)增延伸階段時(shí)間和實(shí)驗(yàn)擴(kuò)增效能情況下,快速變溫速率完成規(guī)定實(shí)驗(yàn)程序。快速光學(xué)反應(yīng)板可確保在 10–30 uL 反應(yīng)體積下獲得與標(biāo)準(zhǔn)常量實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng)一致的檢測(cè)精度,而更快速得到實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
快速熱循環(huán)技術(shù),最短可在30分鐘內(nèi)完成一次運(yùn)行。
3、高分辨率熔解曲線分析。
Applied Biosystems熔解曲線分析軟件(High Resolution Melting Analysis,HRM)軟件,易于使用,可通過(guò)HRM分析實(shí)現(xiàn)更精確的突變篩查和基因分型分析。
4、21 CFR Part 11合規(guī)管理功能
21 CFR Part 11合規(guī)管理軟件,內(nèi)含安全、審計(jì)、電子簽名套件,實(shí)現(xiàn)運(yùn)行和數(shù)據(jù)的合規(guī),可滿足實(shí)驗(yàn)管理符合美國(guó)聯(lián)邦法規(guī)第21章第11節(jié) (21 CFR Part 11)的規(guī)定。
5、AB提供IQ/OQ/IPV驗(yàn)證支持解決方案
經(jīng)驗(yàn)證的AB工程師可幫助執(zhí)行Installation Qualification(IQ)/Operational Qualification(OQ)和Iinstrument Performance Verification(IPV)流程操作。
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