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品牌: biomedworld 公司: 沃登醫學

提供商： 沃登醫學 服務名稱： 細胞免疫熒光

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細胞免疫熒光一、細胞免疫熒光服務介紹免疫熒光技術服務（Immunofluorescence technique）又稱免疫熒光抗體染色，是標記免疫技術中發展最早的一種。它是基于免疫學、生物化學和顯微鏡技術建立起來的一項技術。由于抗原-抗體反應具有高度的特異性，我們不僅能夠看到待測樣本中目的蛋白的位置，同時也能通過熒光的強度推測反應蛋白的含量。如果使用兩種以上的抗體進行染色，我們可以觀察到多種蛋白在組織中的分布，以及相互作用關系等。用于標記蛋白的熒光素主要有異硫氰酸熒光黃（FITC），四乙基羅丹明（RB200）和四甲基異硫氰酸羅丹明（TMRITC）。 直接染色法： 將標記的特異熒光抗體直接滴加在抗原標本上，經過一定時間的染色。洗去多余的熒光抗體，在熒光顯微鏡下便可以觀察到由于抗原抗體結合而發出的熒光。此方法操作簡單，實驗流程短。缺點是：一種標記抗體只能檢測一種抗原，敏感性略差，使用此方法應設置陽性和陰性對照。 間接染色法： 使用此方法檢測的時候，先用未標記的一抗與抗原標本進行反應，反應一段時間后洗去多余抗體，再使用標記有熒光的二抗抗體與一抗反應。如果第一步中的抗原和抗體互相反應，則會形成抗原-一抗-二抗的復合物，再洗去未反應的標記抗體，在熒光顯微鏡下便能夠看到熒光。二、細胞免疫熒光服務內容1.已轉染72h的細胞種于共聚焦專用培養皿里，預冷PBS洗三遍，每次5分鐘；2.細胞半干時，覆蓋以4%冷的多聚甲醛固定15分鐘，避光；3.吸去多聚甲醛后，用預冷PBS洗三遍，每次5分鐘；4.0.5% TritonX-100覆蓋細胞10分鐘，預冷PBS洗三遍，每次5分鐘；5.與二抗相同宿主的血清室溫封閉30分鐘；6.配制一抗：SAB + FBS = 1:200；7.加入一抗覆蓋細胞，錫紙包裹4℃避光過夜；8.取出細胞復溫至室溫約1 h；9.冰1‰Tween洗兩次，每次5分鐘，于搖床。冰PBS洗一次，5分鐘，于搖床；10.配制熒光標記二抗：用FBS配制，濃度1:200；11.加入二抗，室溫孵育1小時，避光；12.冰1‰Tween洗兩次，每次5分鐘，于搖床。冰PBS洗一次，5分鐘，于搖床；13.DAPI染核，每皿1滴，完全覆蓋住細胞即可；14.冰1‰Tween洗兩次，每次5分鐘，于搖床。冰PBS洗一次，5分鐘，于搖床；15.加入防熒光淬滅封片劑封片，避光；16.上機confocol。細胞免疫熒光染色結果三、細胞免疫熒光 服務說明1. 簽訂實驗協議；2. 客戶提供：1） 客戶可以提供已經制備但未做進一步處理的細胞爬片、石蠟切片、冰凍切片等；2） 客戶可以提供組織樣品，委托我們完成樣品切片的制備；3）客戶可以自行提供抗體，也可使用公司抗體庫中抗體。3. 實驗周期及服務費用因樣品的數量而改變，具體詳詢本公司。四、細胞免疫熒光服務質量承諾1．返還未使用的客戶提供的抗體；2．真實的實驗原始數據；3．權威的檢測報告；4．詳細完整的實驗流程。