品牌: biolzy
公司: 上海聯碩生物科技有限公司
服務名稱： 流式細胞術檢測技術服務
產品詳情請聯系金山科研平臺微信：jinshanbio 流式細胞術檢測技術服務 作者：聯碩生物1、檢測項目：(1)細胞周期細胞（2）細胞凋亡(3)免疫細胞分型(4)表面抗原鑒定(5)細胞內鈣離子檢測(6)線粒體功能(7)細胞分選2、樣本及來源：1)單個細胞：1~2×106個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。2)外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。說明：1、實驗所用的流式細胞儀為COULTEREPICSXL。2、送檢樣本量：1)、單個細胞：1~2×106個細胞左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。2)、外周血：EDTA或肝素抗凝全血，5ml左右；來源于人、小鼠、大鼠或其它。3、用戶需要進行流式細胞儀檢測時須提前預約，同時說明實驗目的、方法等。一次送檢標本數不少于10個。如果一次送檢標本總數不足10個，每個測試費用為標準收費×2。4、我公司在正式接受實驗委托一周內交付實驗結果。所提供實驗結果忠實于樣本的實際情況。5、用戶須一次性全額預付實驗費。6、部分常用熒光探針，如PI等，我公司可免費提供，；特殊標記物，如CD抗體等，用戶須另行購買，也可委托我公司代購；用戶所提供抗體應可與樣本發生特異性識別反應。7、由用戶提供的樣品或試劑所致的實驗問題由用戶負責。8、請在表中說明檢測具體要求（可另附頁），由于填寫資料不詳所致任何問題由用戶負責。9、請在送樣的同時提供樣本來源及處理方法等信息，樣品檢測后原則上本公司不負責保存。客戶提供：（1）標本:組織、細胞、全血（抗凝）（2）抗體（熒光素標記）PE最強，適用于弱表達抗原FITC最便宜，適用于強表達抗原，適用范圍廣biotin-avidin不適合弱抗原的檢測（3）其他試劑（如Fluo-3）（4）染色試劑盒附：流式細胞術檢測樣品推薦制備方法：A.直接標記抗體（FITC標記抗體）：(1)、收集1×106個細胞，800rpm離心5min，4℃以上冷PBS洗一次。(2)、用4%多聚甲醛1ml室溫固定40分鐘，800rpm離心5min去上清。加2mlPBS重懸洗滌細胞，800rpm離心5min。(3)、用1ml含5%人血清的PBS重懸細胞，冰上孵育10min，800rpm離心5min去上清。加入200ul含0.5%BSA和飽和劑量的熒光標記抗體(5×105個細胞/20ul抗體)的PBS,避光冰上放置30min,離心棄上清。加入200ul1%多聚甲醛固定，待測即可。(4)、用流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10000個細胞。B.未標記抗體間接免疫熒光標記法：(1)、收集2×106個細胞，用冷的PBS2ml洗滌細胞一次，800rpm離心5min。(2)、用2ml4%多聚甲醛室溫固定細胞40min,800rpm離心5min；2mlPBS重懸細胞，800rpm離心5min；(3)、用1ml含0.2%Triton-X100和5%血清的PBS重懸細胞，冰上放置10min,800rpm離心5min。(4)、加入飽和劑量未標記抗體，冰上放置40min,800rpm離心5min，用2ml冷的PBS重懸細胞，800rpm離心5min，洗去未結合一抗，重復一次。(5)、加入熒光標記（FITC）標記的二抗，冰上避光放置40min后，800rpm離心5min，去上清，PBS洗滌兩次。(6)、加入0.5ml1%多聚甲醛重懸細胞；固定待測。(7)、流式細胞儀檢測熒光值,每管計數10000個細胞。C.細胞周期、細胞凋亡及DNA倍體分析樣品（PI染色）的制備：(1)、待測樣本制成單細胞懸液，然后2000轉/分離心5分鐘，棄上清。(2)、用4℃預冷的70%冷乙醇固定，4℃保存，至少固定18小時。(3)、調整細胞濃度為106細胞/毫升，取1毫升細胞懸液，用PBS洗三次，細胞重懸于1毫升PI染液中，37℃孵育30分鐘即可進行流式分析。(4)、PI染液終濃度為50微克/毫升，RNaseA終濃度為20微克/毫升。注：本方法僅供參考，如有其它要求，請在送樣前說明。
服務項目樣品外理應用的試劑收費細胞周期細胞細胞——胰酶消化——PBS洗——70%乙醇4℃固定過夜（不超過一周）RNA酶，PI染料<10個樣品，80元/個>10個樣品，60元/個試劑費已包括。細胞凋亡新鮮培養的細胞AnnexinV-FITC細胞凋亡檢測試劑盒<10個樣品，150元/樣品>10個樣品，120元/樣品已包括試劑費用，客戶提供試劑可減20元另需細胞培養費用。免疫細胞分型培養的細胞：如白血病細胞，客戶刺激好的細胞、抗凝全血、脾勻漿破膜劑，固定劑，刺激劑、特異性抗體（需客戶提供）雙染：<10個樣品，120元/樣品>10個樣品，100元/樣品三染：在原來基礎上加30元需要分離細胞、培養、刺激的具體情況另記表面抗原鑒定培養的細胞特異性抗體（需客戶提供）單染：<10個樣品，80元/樣品>10個樣品，60元/樣品雙染：在原來基礎上加30元三染：在原來基礎上加30元細胞內鈣離子檢測培養的細胞Fluo-3AM(鈣離子熒光探針)<10個樣品，100元/樣>10個樣品，80元/樣品（已包含試劑）線粒體功能僅適用于懸浮或貼壁培養的新鮮細胞客戶提供試劑盒檢測費可同細胞周期細胞分選收費：標記費用+分選儀使用費用價格體系類似于共聚焦
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