Cellstain- PI試劑貨號：P346
3,8-二氨基-5-[3-(二乙基家氨基)丙基]-6-苯基啡啶二碘（3,8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenylphenanthridinium diiodide）
CAS號：25535-16-4
商品信息
儲存條件：0-5度保存，避光
運輸條件：室溫
分子式：
C27H34I2N4
分子量：
668.39
特點：
●與死細胞DNA結合
●常用于細胞凋亡檢測
● 可與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用
選擇規格：
1 mg
細胞染色
湊單關聯產品TOP5
NO.1.Calcein-AM細胞質染色
NO.2. GSSG/GSH Quantification Kit II氧化型/還原型谷胱甘肽
NO.3. Amine Coupling Kit自組裝單分子膜SAM
NO.4. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit細胞凋亡檢測
NO.5. Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit細胞凋亡檢測
規格性狀
規格
特性：該產品為紅棕色粉末或固體，易溶于水和稀鹽酸。
水溶性：試驗成功
NMR光譜：試驗成功
產品概述
熒光染料PI（碘化丙啶）是一種可對DNA染色的細胞核染色試劑，常用于細胞凋亡檢測，英文全稱是Propidium Iodide。它是一種溴化乙啶的類似物，在嵌入雙鏈DNA后釋放紅色熒光。盡管PI不能通過活細胞膜，但卻能穿過破損的細胞膜而對核染色。PI經常被用來與Calcein-AM或者FDA等熒光探針一起使用，能同時對活細胞和死細胞染色。PI-DNA復合物的激發和發射波長分別為535nm和615nm。
熒光特性
λex=530 nm, λem=620 nm
操作說明
1.用PBS或適當的緩沖液制備10-50μMPI溶液。a）
2.在細胞培養基中加入體積為細胞培養基1/10的PI溶液。b）
3.將細胞在37oC下孵育10-20分鐘。
4.用PBS或適當的緩沖液清洗細胞兩次。
5.在帶有535 nm激發光和615 nm發射濾光片的熒光顯微鏡下觀察細胞。
a）由于PI可能致癌，因此在處理過程中必須格外小心。
b）或者您可以用1/10濃度的PI緩沖溶液代替培養基。
文獻
1) I. W. Taylor and B. K. Milthorpe, “An Evaluation of DNA Fluochromes, Staining Techniques, and Analysis for Flow Cytometry. I. Unperturebed Cellpopulations”,J. Histochem. Cytochem.,1980,28(11), 1224.
2) W. M. J. Vuist, F. V. Buitenen, M. A. De Rie, A. Hekman, P. Ruemke and C. J. M. Melief, “Potentiation by Interleukin 2 of Burkitt’s Lymphoma Therapy with Anti-Pan B (Anti-CD19) Monoclonal Antibodies in a Mouse Xenotransplantation Model”,Cancer Res.,1989,49, 3783.
3) A. K. El-Naggar, J. G. Batsakis, K. Teague, L. Garnsey and B. Barlogie, “Single- and Double-stranded RNA Measurements by Flow Cytometry in Solid Neoplasms”,Cytometry,1991,12, 330.
4) C. Souchier, M. Ffrench, M. Benchaib, R. Catallo and P. A. Bryon, “Methods for Cell Proloferation Analysis by Fluorescent Image Cytometry”,Cytometry,1995,20, 203.
5) T. Irino, T. Kitoh, K. Koami, T. Kashima, K. Mukai, E. Takeuchi, T. Hongo, T. Nakahata, S. M. Schuster and M. Osaka, “Establishment of Real-Time Polymerase Chain Reaction Method for Quantitative Analysis of Asparagine Synthetase Expression”,Mol. Diagn.,2004,6, 217.
常見問題Q&A
| Q1:核染色中所用染料的特征和區別是什么？
|
| A1：
這里引入的染料具有通過與核酸相互作用而發出熒光或增加熒光強度的特性。
除熒光波長以外的差異如下。
[EB]
它沒有堿基特異性，可與所有DNA和RNA結合。
它沒有活細胞的膜通透性，并且可以染色死細胞。
[PI]
像EB一樣，它沒有基礎特異性。它是一種更廣泛使用的染料，因為插入時它的熒光強度比EB高。
它沒有活細胞的膜通透性，并且可以染色死細胞。
[DAPI]
與雙鏈小槽結合。它與腺嘌呤-胸苷簇具有高度結合。
它沒有活細胞的膜通透性，并且可以染色死細胞。
[AO]
通過利用插入雙鏈時和與單鏈磷酸結合時熒光波長不同的事實，可以在雙鏈和單鏈之間進行區分。
它滲透到活細胞的細胞膜上。
[Hoechst33342，33258]
它與DNA的腺嘌呤胸苷部分特異性結合。
它是一種顏料，可以滲透到活細胞的細胞膜上并染色活細胞的DNA。 |
| Q2：細胞染料的激發波長和發射波長是多少。 |
| A2： |
| Q3:如何使用PI進行核染色？ |
| A3:一個例子如下所示。根據細胞類型和觀察條件，考慮細胞固定和試劑濃度。
[使用示例①]
Vollenweider等人進行了PI染色，并在熒光素激活的殺傷（LAK）細胞增殖試驗中使用了熒光板讀數器進行了測量。
此時的濃度為0.5 mg / mL PBS（-）。所用濃度為5μg/ mL檸檬酸鈉溶液，每孔100μL用于熒光染色。
·I.Vollenweider，P.Groscurth，J.Immunol.Methods，149，133（1992）。
[用法示例（2）]
（1）對于包含實體瘤或團塊的樣品，請用0.02％tripsinEDTA處理。
在37°C下孵育30分鐘后，以1500 rpm進行5分鐘，然后棄去上清液。
（2）在-20℃用50％甲醇固定后，以1500rpm進行5分鐘，并棄去上清液。
（3）在-20℃下用30％甲醇洗滌后，以1500rpm進行5分鐘，棄去上清液。
（4）用0.2 mol / L磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）洗滌后，以1500 rpm進行5分鐘，并棄去上清液。
（5）每106個細胞RNase 0.2 mol / L磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）溶液（1 mg / mL）
加入0.2 mL，并在37°C下孵育30分鐘。
（6）用0.2 mol / L磷酸鹽洗滌后，以1500 rpm進行5分鐘，并棄去上清液。
（7）加入10 mL PI溶液（50μg/ mL），在黑暗中于4°C染色2小時。
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