轉染試劑——HilyMax貨號：H357
陽離子脂質體轉染試劑
HilyMax
商品信息
儲存條件：0-5度保存
運輸條件：室溫
特點：
·脂質體轉染試劑，毒性低
·胞慢病毒轉染率高
·實驗案例豐富
選擇規格：
0.5 ml
1 ml
湊單關聯產品TOP5
NO.1.Cell Counting Kit-8細胞增殖毒性檢測
NO.2. Annexin V, FITC Apoptosis Detection Kit細胞凋亡檢測
NO.3. Caspase-3 Assay Kit-Colorimetric-細胞凋亡檢測
NO.4. Annexin V, 633 Apoptosis Detection Kit細胞凋亡檢測
NO.5. Cytotoxicity LDH Assay Kit-WST乳酸脫氫酶(LDH)檢測
試劑盒內含
1 ml HilyMax Reagent 1 tube×1
LipoformBuffer 1.0 mL×1
產品概述
HilyMax 是Dojindo公司研發的一種新型陽離子脂質體基因轉染試劑，可用于高效轉染多種細胞系及siRNA。HilyMax具有不受培養基中血清影響，轉染過程不需更換培養基等特點。另外HilyMax試劑中不含影響轉染效率的成分。
產品特性
應用：基因轉染
特點：
1.實驗操作簡單
2.可用于貼壁細胞和懸浮細胞的瞬轉及穩轉。
3.適用于含血清的的培養基，毒性低，轉染效率高且穩定。
4.適用于SiRNA的轉染實驗。
5.與同類進口產品相比，價格較低。
訂購前請來電咨詢各細胞系的相關條件優化
各細胞系GFP轉染實例
實驗操作
基本操作：轉染步驟（24孔板）a)
1．細胞準備
貼壁細胞：轉染前一天，調整細胞濃度在0.5 ml的培養基中預先接種40%-90%的匯合細胞b），轉染前將細胞懸液接種至24孔板。
懸浮細胞：轉染前一天，調整細胞濃度至每0.5 ml的培養基中0.1-1.6×106的細胞，細胞懸液接種至24孔板。
2．形成DNA-HilyMax轉染復合物c）
添加不含血清的培養基至消毒離心管。d)
添加質粒DNA（0.5-1，5μg）至離心管，使用移液器充分混合。
添加HilyMax至離心管，使用移液器充分混合，推薦的DNA（μg）與HilyMax的使用比率為1:2-1:6。
在室溫下培養15分鐘e)
3．添加轉染復合物至細胞：在步驟1準備好的培養板上，每孔中添加DNA-HilyMax轉染復合物。
4．培養：在37℃下放置于CO2培養箱培養。f)
5．檢測：確保轉染后24至72小時，基因的活性
a)實驗用量需要根據培養板大小而改變，請參考說明書“不同培養板轉染狀況”部分。
b)培養基中血清成分不會影響轉染效果。
c)DNA及HilyMax的參考密度見表1。
d)培養基中的血清及抗生素會影響DNA-HilyMax轉染復合物的形成。Opti-MEM, DMEM和MEM不會影響轉染效果，請使用其他培養基來檢驗轉染效率。
e)培養時間超過30分鐘會造成轉染效率偏低。
f)轉染后更換培養基可以有效地提高轉染效率，降低某些細胞系的毒性。
轉染復合物中DNA與HilyMax的使用量：
表1：表明了不同細胞密度下推薦的DNA和HilyMax量。如果轉染效率較低，請適當提高HilyMax的量；
如果毒性過高，請適當降低HilyMax的使用量。
表2：表明了不同大小培養板的系數。這些系數是在24孔板下計算得出的，表1中DNA和HilyMax的數據可以乘上這些系數。
不同培養板轉染狀況：
表3：不同培養板適合的培養基、DNA的使用量以及DNA和HilyMax混合比率列。
NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7推薦轉染條件：
NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7在24孔板培養的最適轉染條件顯示在表4中，每種細胞系DNA和HilyMax溶液最適量及其密度以及轉染實驗的基本操作。
若使用其他培養板請參考表3。
轉染后培養基的更換：
轉染后更換培養基可以有效地提高NIH3T3, HEK293, CHO, HeLa及COS-7的轉染效率（請見表圖）。
這五種細胞系轉染后2到4小時更換培養基可以獲得更高的轉染率。
表4：五種細胞的實例
24孔板上轉染發生于80%匯合細胞中， DNA和 HilyMax 分別為 1μg和3-7μl。轉染1至8小時后,更換新的培養基
有詳細操作方案的細胞種類：
（歡迎來電或郵箱索取各細胞系操作優化條件）
?A549 Cell ?HepG2 Cell ?MDCK Cell ?Caco2 Cell ?K562 Cell
?Neuro2a Cell ?Vero Cell ?CHO Cell ?L6 Cell ?NIH3T3 Cell
?HEK293 Cell ?LNCap Cell ?PC3 Cell ?HeLa Cell ?MCF7 Cell ?PC12 Cell
技術情報
使用HilyMax及I社產品轉染率對比
使用HilyMax及R社產品Luciferase表達比較
★細胞系：用于HEK293、NIH3T3、CHO、HeLa、COS-7轉染效果較好，具體請參考下列圖表（實驗案例）
★DNA：用于純化質粒DNA（A280/A260=1.7-1.9）推薦轉染的DNA濃度為0.15-1.0 mg/ml。轉染中DNA的最佳使用量取決于細胞的類型及細胞密度。
★HilyMax：轉染時HilyMax的最佳使用量取決于細胞的類型及細胞密度。若HilyMax使用量過低會致使轉染效率低，而使用量過高則會產生較強的毒性，請在第一次實驗時把DNA（μg）與HilyMax的使用比率控制在1:1-1:6之間。
★細胞密度：推薦的轉染細胞密度為40%-90%的匯合細胞，最佳細胞密度取決于細胞類型。
★轉染后培養基的更換：在轉染后更換培養基可以提高轉染效率，還可降低一些細胞系的毒性。推薦轉染2到4小時后更換培養基
HilyMax的使用準備:
添加1.0 ml Lipoform緩沖液于HilyMax試劑中，使用渦旋器振蕩混合30秒。請檢查HilyMax試劑是否完全溶解，如果溶液中仍有部分不溶殘留物，需繼續振蕩或使用移液器充分混勻，直到完全溶解。
提醒：轉染效率與細胞種類、細胞濃度以及DNA與HilyMax的混合比例等情況有關，請參照以下優化條件操作。
儲存注意事項：
試劑盒保存在0-5℃
添加過Lipoform緩沖液的HilyMax溶液在-20℃下可以儲存6個月。
若經常使用， HilyMax溶液可放置于在0-5℃下， 請在1-2個月內用完。
解凍開啟過的HilyMax溶液，需使用渦旋器和移液器使其充分混勻。
HilyMax溶液在反復冷凍和解凍后會有小部分出現不溶，但這并不會影響轉染效果。
參考文獻
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常見問題Q&A
| Q1、基因轉染后需要更換培養基嗎？ |
| A1、如果您想讓細胞毒性更低或者轉染效率更高一些，建議更換培養基。但是有些細胞（如CHO細胞）案例，更換培養基不會影響毒性和轉染率。 |
| Q2、轉染效果不好的情況下，應當考慮調整哪些方面？（DNA量，HilyMax量，復合物形成比，時間等） |
| A2、<細胞毒性低>
轉染效率極低的情況下，可以增加DNA量，或是DNA（μg）：HilyMax（μL）=1:5～1:9。
可以提高轉染效率。
<細胞毒性高>
可以減少DNA量或HilyMax量。 |
| Q3、說明書中寫了保存條件為“冷藏”和“冷凍”兩種。怎么保存比較好呢？一開始就冷凍，一直冷藏是不行的嗎？ |
| A3、未開封、未使用時請“冷藏保存”，試藥和緩沖液混合溶解后請“冷凍保存”。即使在未開封的狀態下冷凍保存，質量也沒有問題，但是使用時需要將冷凍的Lipoform Buffer融化。
另外，溶解后如果在2~3周內用完的話，即使“冷藏保存”也不會影響性能。超過數周使用時，請務必“冷凍保存”。 |
| Q4、DNA-Hilymax轉染復合物培養是否超過30分鐘？ |
| A4、超過30分鐘的培養會造成過低的轉染率。 |
| Q5、DNA和Hilymax的量是否為最優比率？ |
| A5、DNA和Hilymax的量的比率會較大影響轉染效率，請參考表1優化轉染。某些條件下，增大DNA或HIlymax的使用量會提高轉染效率，如果轉染效率仍很低，那么優化后請改變DNA(ug)：Hilymax(ul)比率至1：7-1：9或把DNA量提高到1.5-2倍。若毒性過強，請降低Hilymax在DNA-Hilymax轉染復合物中的比率。 |
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