ACE Kit – WST試劑盒貨號：A502
用于檢測血管緊張素轉化酶(ACE)抑制劑活性的試劑盒
ACE Kit – WST
商品信息
儲存條件：0-5度保存
運輸條件：室溫
選擇規格：
100tests
50tests
概述
血管緊張素轉換酶(ACE)可以通過血壓調節機制之一的腎素-血管緊張素系統，將血管緊張素Ⅰ(AngiotensinⅠ)轉化成具有升壓作用的血管Ⅱ(AngiotensinⅡ)。同時，它還可以分解降壓肽之一的緩激肽(Bradyinin)，是一種與血壓上升有很大關系的酶。近年來，市面上有許多以預防高血壓為目的的功能性食品(特定保健用途食品)，而其中具有ACE抑制活性的食品備受關注。傳統的ACE抑制活性檢測法是通過測定馬尿酸在228nm處的吸光度來計算的，馬尿酸是從合成底Hippuryl-His-Leu中生成，經過乙酸乙酯溶劑提取、濃縮干燥、再溶解得到的。該方法需要使用乙酸乙酯等有害的有機溶劑，且操作復雜，容易產生測量誤差，因此急需一種操作更簡單、結果更準確的檢測方法。同仁化學研究所開發的ACE Kit-WST是一種新型酶法檢測試劑盒。通過檢測3-Hydroxybutyryl-Gly-Gly-Gly(3HB-GGG)中得到的3-Hydroxybutyric acid(3HB)，可以更安全、快速、簡單的檢測ACE抑制活性。本方法還可以使用96孔板進行多樣品檢測，進一步提高了檢測的快捷性和重現性。
檢測原理
特點
檢測過程約2小時
檢測時，只需要將樣品溶液和試劑加入96孔板，培養(60 min; 10 min)，檢測吸光度即可。
與傳統法的比較
本試劑盒對應96孔板酶標儀檢測，可以一次檢測多個樣品。而且無需使用有毒性的有機溶劑，可以更安全、快速、簡便的得到高重現性的檢測結果。
實驗例
東當歸處理過程中ACE抑制活性的變化3)
日本奈良縣農業綜合技術中心的淺尾研究員使用本試劑盒對日本大和地區的東當歸在收獲過程中，ACE抑制活性(IC50值)的變化進行了研究。研究結果對收獲過程中的處理操作在ACE抑制活性方面的藥理學影響有重要參考價值。
樣品的前處理
各樣品經過凍結干燥、粉碎成粉后加入20倍的蒸餾水，在40℃下振蕩(100 rpm)30 min，最后通過離心分離(3000 ×g, 10 min)獲得的上清液作為樣品溶液。
抑制曲線例
檢測波長：450 nm
橫坐標為樣品濃度
參考文獻
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常見問題Q&A
| Q1：可以檢測ACE活性嗎？ |
| A1：不可以檢測ACE活性。
本試劑盒是檢測ACE抑制劑活性的試劑盒。 |
| Q2：本試劑盒的優點是什么？ |
| A2：優點是 安全、快速、簡便。
「無需使用有機溶劑」、 「一次檢測多個樣品」、 「實驗結果重現性高」
*傳統方法需要使用乙酸乙酯進行溶解、濃縮干燥再檢測。操作非常繁雜，容易引入誤差。 |
| Q3：可以檢測多少個樣品？ |
| A3：根據實驗目的不同，分別準備了「確認抑制活性的有無」和「檢測IC50」兩種操作步驟。
Protocol 1：n=3時，可檢測14個樣品(50 tests)，28個樣品(100 tests)
Protocol 2：n=3時，可檢測2個樣品(50 tests)，4個樣品(100 tests)
詳情請參考產品說明書。 |
| Q4：樣品在前處理的時候有什么需要注意的嗎？ |
| A4：「樣品前處理實例(蔬菜/水果等)」
樣品為食品時，首先將樣品研磨勻漿，然后離心分離，取上清液為樣品溶液。如果樣品有混濁，請通過過濾和稀釋等手段，盡量保證樣品呈澄清狀。如果樣品本身有顏色，適當稀釋至不影響檢測的范圍內。（詳見說明書）檸檬酸等酸性較強的樣品(pH4~5)，會使Substrate buffer中的3HB-GGG發生沉淀，影響檢測?？杉尤肷倭刻妓釟溻c粉末，中和后離心分離，取上清進行實驗。 |
| Q5：樣品中有非水溶性物質，是否可以檢測？ |
| A5：如果待測樣品是非水溶性的，先使用DMSO或乙醇溶解制成Stock solution，然后再用 Buffer進行稀釋，并控制DMSO或乙醇的含量在1%以下。 |
| Q6：對檢測有影響的物質有哪些？ |
| A6：樣品中如果有還原性物質或者氨基?；傅葘?HBDH有抑制作用的物質，會影響檢測。 |
| Q7：如果將Enzyme B和Enzyme A的溶解順序顛倒的話會有什么問題嗎？ |
| A7：會導致靈敏度降低。
請務必按照先用純水溶解Enzyme B，再用Enzyme B溶液溶解Enzyme A的順序。 |
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