Biofilm Formation Assay試劑貨號：B601
生物被膜形成量/抑制能力檢測試劑盒
可以檢測生物被膜的形成量和抑制生物被膜形成能力
商品信息
儲存條件：陰暗處保存
運輸條件：常溫
選擇規格：
96tests
活動進行中
規格性狀
產品概述
特長和操作
產品特點
操作
產品選擇指南
Biofilm關聯產品
檢測實例
參考文獻
常見問題Q&A
活動進行中
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湊單關聯產品TOP5
NO.1.Microbial Viability Assay Kit-WST微生物活性檢測
NO.2.Biofilm Viability Assay生物被膜藥物殺傷效果檢測
NO.3. Biofilm TestPiece Assay Kit材料表面生物被膜形成能力檢測
NO.4. CTC細菌計數、染色
NO.5. Bacstain- CTC Rapid Staining Kit細菌活力檢測
規格性狀
?Crystal Violet Solution 22 ml×1
?96-peg-Lid×1
?96-well Plate ×10
在針狀孔板蓋(96-peg-Lid)的針狀突起表面形成生物被膜
產品概述
生物被膜(Biofilm)是一種主要由細菌體外的多糖組成的膜狀復合體，可以在幾乎所有的環境下廣泛存在。醫療器具的細菌污染、齲齒、牙周炎等感染癥等都與生物被膜的形成有關。由于生物被膜一旦形成，會對抗生素等藥物產生抗性，進而引起嚴重的污染問題。因此，具有抑制生物被膜活性的藥物和食品成分成為近年來的研究熱點。
Biofilm Formation Assay Kit是通過結晶紫(Crystal Violet)法，對生物被膜形成量和藥物對生物被膜抑制能力進行檢測的試劑盒。檢測過程中，生物被膜在孔板蓋的針形突起表面生長，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脫落。同時，通過使用多孔板，可以一次性進行多樣品檢測。
結晶紫(Crystal Violet)染色法
1982年，Pedersen通過對比結晶紫(Crystal Violet)的吸光度與各種微生物生成的生物被膜的干燥重量，發現兩者呈線性相關。因此結晶紫染色法作為最經典的生物被膜檢測法一直沿用至今。
參考文獻：K.Pedersen,”Methodfor Studying Microbial Biofilms in Flowing-Water Systems”,Appl. Environ. Microbiol., 1982,43(1), 6.
特長和操作
BiofilmFormationAssayKit的特長和操作
產品特點
特點①檢測時間大幅縮短
傳統的多孔板檢測方法是在96孔板的內壁和底部生成生物被膜，在細菌的培養和清洗等過程中，需要一個孔一個孔的進行操作，增加了大量的操作步驟和時間。而本試劑盒檢測方法中，生物被膜在針狀突起孔板蓋的突起表面生成，只需移動孔板蓋就可完成，使得操作變得異常簡便。
特點②減小復孔間的孔間差
由于傳統法是在96孔板的內壁和底部形成生物被膜，在清洗等操作時非常容易造成生物被膜的脫落，所以復孔間的孔間差過大一直是傳統方法的一大弊端。本試劑盒的方法是在孔板蓋的突起處的表面形成生物被膜，大幅減少操作中生物被膜脫落的情況。
<使用本方法的參考文獻>
T.Tsukatani, F. Sakata, R. Kuroda, “A rapid and simple measurement method for biofilm formation inhibitory activity using 96?pin microtiter plate lids”,World J. Microbiol.Biotechnol.,2020, doi:10.1007/s11274-020-02964-6.
I. Okamoto etc.,“Antibacterial and Antibiofilm Photodynamic Activities of Lysozyme-Au Nanoclusters/Rose Bengal Conjugates”,ACS Omega,2021,doi:10.1021/acsomega.1c00838
操作
本試劑盒可以對生物被膜形成量和藥物對生物被膜抑制能力進行檢測。檢測過程中，生物被膜在孔板蓋的針形突起表面生長，所以在清洗和染色操作中生物被膜不易脫落。同時，通過使用多孔板，可以一次性進行多樣品檢測。
產品選擇指南
針對兩種不同用途的試劑盒選擇
使用針狀孔板蓋(96 Peg-Lid)的試劑盒一共有兩款，分別通過結晶紫染色法和WST顯色法進行檢測，供您根據具體的需求自由選擇。
兩種試劑盒的選擇方法
*不同的菌種，生物被膜的形成條件(培養基、培養時間等)也不相同。建議先使用Biolfilm Formation Assay Kit(本產品)進行摸索。具體的摸索方法請參考FAQ “如何摸索生物被膜最佳實驗條件”
*本試劑盒是由同仁化學研究所和日本福岡縣工業技術中心—生物食品研究所共同開發。
Biofilm關聯產品
本系列的其他產品介紹
用檢測片評價抗菌材料對生物被膜的抑制能力
Biofilm TestPiece Assay Kit(貨號：B606)
需要對抗菌材料的生物被膜抑制能力進行評價的時候，使用同仁化學研究所獨自研發出的TestPiece Holder(檢測片固定蓋)可以大幅縮短檢測時間，并且得到重現性更高的檢測數據。
與傳統法的比較
菌種：Staphylococcus aureusNBRC13276
復孔數：n=8
檢測實例
常見的生物被膜檢測指標有兩種：MBIC(Minimum Biofilm Inhibitory Concentrations,抑制生物被膜形成的最低濃度)和MBEC(Minimum Biofilm Eradication Concentrations,細菌生物被膜的最小清除濃度)。下面用各試劑盒分別檢測對S.aureus(金黃葡萄球菌)的MBIC和MBEC。
常見問題Q&A
| Q: 如何摸索生物被膜的最佳實驗條件? |
| A：一般對于生物被膜最佳實驗條件的摸索項目有：培養基的種類、細菌的接種濃度、培養基的更換次數、培養時間、培養溫度等。 下面針對培養基的種類、細菌的接種濃度、培養基的更換次數、培養時間作為檢測實例進行摸索。如果要摸索培養溫度的最佳條件，需要準備多個Biofilm Formation Assay Kit(B601)。
摸索實驗例1
不同的培養基種類、細菌播種濃度、培養基交換條件下，檢測生物被膜的形成量。
(孔板設置例)
日程表
*每隔24 h更換一次新的培養基。
操作步驟：
1)第1天：96-well Plate①的A行和B行的每個孔中播種180 μl用培養基A至D制備的濃度①和②的細菌溶液。C行~H行留空，蓋上96-peg Lid，在適宜溫度下培養24 h。
例: 細菌濃度①約107 CFU/ml，細菌濃度②約106 CFU/ml。
2) 第二天：將180 μl不含細菌的培養基加至96孔板②的A、B行的孔中。如圖例所示，C、D行的各孔中加入180 μl培養基A~D配制的細菌濃度①和②細菌懸液。E行~H行留空。
將步驟1)中的96-peg Lid 蓋在96-well Plate②上，在適宜溫度下培養24 h。
3) 第三天：將180 μl不含細菌的培養基加至96-well Plate③的A行~D行各孔中，如圖例所示，E、F行的各孔中加入180 μl培養基A~D配制的細菌濃度①和②細菌懸液。G、H行留空。
將步驟2)中的96-peg Lid 蓋在96-well Plate③上，在適宜溫度下培養24 h。
4) 第4天：將180 μl不含細菌的培養基加至96-well Plate④的A行~F行各孔中，如圖例所示，G、H行的各孔中加入180 μl培養基A~D配制的細菌濃度①和②細菌懸液。
將步驟3)中的96-peg Lid 蓋在96-well Plate④上，在適宜溫度下培養24 h。
5）按照操作說明書的“生物被膜形成量 /生物被膜形成抑制能力”操作步驟的2~6，在新的96孔板中進行操作。
摸索實驗例2
不同的培養基種類、細菌播種濃度、培養時間條件下，檢測生物被膜的形成量。
(孔板設置例)
日程表
1)第1天：96-well Plate①的A行和B行的每個孔中播種180 μl用培養基A至D制備的濃度①和②的細菌溶液。C行~H行留空，蓋上96-peg Lid，在適宜溫度下培養24 h。
例: 細菌濃度①約107 CFU/ml，細菌濃度②約106 CFU/ml。
2) 第二天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A行和B行不更換培養基，C、D行的各孔中加入180 μl培養基A~D配制的細菌濃度①和②細菌懸液。E行~H行留空。
重新將96-peg Lid 蓋在96-well Plate①上，在適宜溫度下培養24 h。
3) 第三天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A~D行不更換培養基。E、F行的各孔中加入180 μl培養基A~D配制的細菌濃度①和②細菌懸液。G、H行留空。
重新將96-peg Lid 蓋在96-well Plate①上，在適宜溫度下培養24 h。
4) 第4天：取下96-peg Lid，96-well Plate①的A~F行不更換培養基。G、H行的各孔中加入180 μl培養基A~D配制的細菌濃度①和②細菌懸液。
重新將96-peg Lid 蓋在96-well Plate①上，在適宜溫度下培養24 h。
5）按照操作說明書的“生物被膜形成量 /生物被膜形成抑制能力”操作步驟的2~6，在新的96孔板中進行操作。 |
| Q：目前有過檢測實例的菌種有哪些？ |
| A：目前Biofilm Formation Assay Kit(本產品)以及同系列產品Biofilm Viability Assay Kit (貨號：B603)有過實際檢測案例的菌種有：
?Staphylococcus aureus（金黃葡萄球菌）
?Pseudomonas aeruginosa（綠膿桿菌）
?Escherichia coli（大腸桿菌）
?Streptococcus mutans（蟲牙的病原菌之一）
?Porphyromonas gingivalis（牙周病的發病原因之一）
以上菌種的詳細培養條件等請參考產品說明書。 |
| Q：做細菌被膜抑制藥物的藥效評價時，生物被膜的形成量至少要達到什么程度？ |
| A：使用Biofilm Formation Assay Kit (本產品)時，操作步驟的最后一步，檢測結晶紫(CV)溶液的吸光度時，
O.D.在0.5(590 nm)以上為宜。 |
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