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Microbial Viability Assay Kit-WST試劑盒貨號：M439 微生物活性檢測試劑盒-WST Microbial Viability Assay Kit-WST 商品信息 儲存條件：0-5度保存 運輸條件：室溫 下載說明書 SDS下載 選擇數量：

選擇規格： 100 tests 500 tests 價格： ￥680.00現貨（會員請登錄查看專享價！） 訂購加入購物車 檢測時間短 多孔板多樣品檢測 不易受培養基影響 活動進行中 產品概述 檢測時間大幅縮短 靈敏度更高 傳統方法對比 顯色原理 有檢測實例的微生物 參考文獻 常見問題Q&A

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產品概述

使用水溶性四唑鹽WST-8作為顯色物質的微生物比色法檢測試劑盒。微生物通過能量代謝活動在細胞內生成NAD(P)H，WST-8在電子載體的作用下被NAD(P)H還原成水溶性的甲臜產物(橙色)。甲臜產物的生成量與微生物的能量代謝活性成正比例關系。因此，可以通過橙色的顯色程度確認微生物的存活率和活性。

本產品由同仁化學研究所與日本福岡縣工業技術中心生物食品研究所共同開發。

檢測時間大幅縮短

傳統的微生物活力檢測一般采用克隆形成實驗(Colony Formation Assay)或通過增殖造成的混濁等目視評價方法。這些方法需要的時間很長而且操作繁雜需要一定的熟練度才可以成功檢測。而使用本試劑盒檢測大腸桿菌時，相對于傳統寒天培地法長達22小時的檢測時間，本試劑盒僅需要8小時即可檢測。(1 CFU/ml)

操作上更加簡單快捷，培養后只需要加入試劑即可。檢測時，在96孔板內準備好微生物懸濁液后加入試劑，在培養箱內通過微生物代謝活性開始顯色。

大腸桿菌的增殖檢測例

<檢測步驟>

1.將大腸桿菌(NBRC3972)在TSBYE培養基中進行預培養。2.用Mueller-Hinton(以下略稱為MHB)配制成108CFU/ml的大腸桿菌懸濁液，再用MHB制成10倍稀釋系列懸濁液。3.使用多通道移液器將不同菌體密度的大腸桿菌加入至96孔板中(每孔190μl)。4.使用多通道移液器向各孔中加入10μl顯色試劑。5.為了防止蒸發和污染，用透明密封貼(PCR用等)貼在孔板上，置于酶標儀(VersaMax,日本Molecular Devices)中。6.用動力學測定模式(Kinetics)每隔15 min檢測一次460 nm處吸光度直至24 h。(37℃)

<檢測結果和定量性的確認>

下圖是隨時間變化的大腸桿菌檢測的結果。96孔板的最左列是高密度(約108CFU/ml)，

越往右密度越低，大約每隔1 h各列依次開始顯色。

下圖是圖表化的大腸桿菌檢測的結果。以“達到可以目視的吸光度值0.5所需要的時間(h)”為y軸，以各菌體密度(CFU/ml)為x軸作圖。如下面的直線關系式，確認檢測大腸桿菌的定量性。

y= -0.43Ln(x)+8.01

當x =1時，即1CFU/ml時，y =8.01。因此得知，1個微生物的檢測大約需要8 h。也就是說，經過大約8 h培養后，吸光度如果沒變化的話可以判定大腸桿菌陰性。

靈敏度更高

用容易分辨的“顏色”代替難以分辨的“渾濁度變化”

麥氏(McFarland)比濁法是通過菌液中的渾濁度來判斷活菌數濃度的方法。而本試劑盒是通過顏色的變化檢測活菌數的濃度。因肉眼的極限，使用比濁法無法判斷的低濃度細菌活性，可以用靈敏度更高的本試劑盒進行檢測。

下面是使用微生物定量法檢測水溶性維他命之一的維他命B6的檢測例。與傳統的比濁法相比，可以在更短時間內更靈敏的進行定量。

維他命B6的微生物定量例

<檢測步驟>

1.向96孔板的各孔中加入90μl維他命定量用培養基。2.向96孔板的各孔中加入90μl標準溶液或樣品溶液。3.將10μl配置好的各種需要維他命的菌種液和10μl檢測試劑加入孔中，30℃或37℃下培養一段時間。4.將孔板置于酶標儀，使用終點(End Point)模式檢測460 nm處吸光度。加入傳統法的檢測試劑，檢測610 nm處的吸光度(渾濁度)。

使用微生物：Saccharomyces cerevisiaeATCC9080

使用培養基：維他命B6定量用基礎培養基

培養溫度：30℃

標準物質：吡哆醇鹽酸鹽

<檢測結果和定量性的確認>

下圖是本方法(WST法)和傳統法的直線性的比較結果。本方法在培養24 h時，0.02~1 ng/ml的濃度范圍內呈直線性。而傳統法在培養24 h時，靈敏度仍達不到檢測標準，需要將培養時間延長至48 h才能與本方法進行比較。

藥物耐受性的實驗例

<檢測步驟>

1.將金黃葡萄菌(SA)和耐甲氧西林金黃色葡萄球菌(MRSA)分別播種至96孔板中。然后添加各濃度的抗生素。2.在37℃下培養6 h，添加試劑后再培養2 h進行顯色反應。

<檢測結果和定量性的確認>

SA：Staphylococcus aureus

MRSA：Methicilin-resistant Staphylococcus aureus

傳統方法對比

與傳統抗菌性能實驗(Spot-on-lawn法)的對比

抗菌性能檢測的應用例

同時使用傳統的Spot-on-lawn法(以下簡稱Spot法)和WST法進行抗菌性能對比實驗。Spot法需要用目視的方法確認阻止圓的有無，而且檢測所需的時間也更長。WST法的檢測結果與傳統法的結果相關性一致，而且可以在更短的時間內完成檢測。下面是Spot法和WST法的抗菌性能檢測實例。

用4種檢定菌和待測樣本共5種乳酸菌的培養上清液作為檢測樣本，篩選出具有產生抗菌能力的乳酸菌。

其中乳鏈菌肽(Nisin)生產菌之一的Lactobacillus lactisNBRC12007作為陽性對照，Lactobacillus lactisNBRC100933作為陰性對照。

為了分離出上清液中的抗菌物質，將乳酸菌培養上清液(pH 6.5-6.8)過濾并滅菌，然后用MHB培養基制備稀釋系列，37℃培養6 h。

添加檢測試劑之后，37℃培養2 h。結果顯示傳統法與WST法相關性一致。

檢測針對4種檢定菌的24個供體的時候，Spot法需要12枚dish(每個dish8個檢測點)，檢測時間需要20 h以上。而使用WST法檢測時只需要1塊96孔板，8 h左右即可完成檢測。

顯色原理

微生物通過能量代謝活動在細胞內生成NAD(P)H，WST-8在電子載體的作用下被NAD(P)H還原成水溶性的甲臜產物(橙色)。甲臜產物的生成量與微生物的能量代謝活性成正比例關系。因此，可以通過橙色的顯色程度確認微生物的存活率和活性。

有檢測實例的微生物

真菌(霉菌類)：Mould	真菌(酵母類)：Yeast
AlternariaalternataNBR+B40:B56C31805 Aspergillus flavusNBRC4295 Aspergillus fumigatusNBRC33022 AspergillusnigerNBRC105649 AspergillusterreusNBRC6346 AspergillusustusNBRC4128 AureobasidiumpullulansNBRC6353 ChaetomiumglobosumNBRC6347z CladosporiumcladosporioidesNBRC6348 Exophiala dermatitidisNBRC6421 PaecilomycesvariotiiNBRC33284 PenicilliumcitrinumNBRC6352 PenicilliumpinzophilumNBRC33285 PhomacitricarpaNBRC5287 PseudallescheriaboydiiNBRC32229 RhizopusoryzaeNBRC31005 SporothrixschenckiiNBRC32961 Trichoderma virensNBRC6355 Trichophyton rubrumNBRC 5807	Candida albicansATCC90028 Candida albicansJCM 1542 Candida albicansSC5314 CandidakruseiNBRC1395 CandidaparapsilosisNBRC1396 Candida utilis CryptococcusalbidusNBRC0378 Cryptococcus neoformansATCC66031 Saccharomyces cerevisiaeNBRC2347 TrichosporonasahiiNBRC103889 TrichosporonasahiiM9459 TrichosporonasahiiM9925 Zygosaccharomycesrouxi
革蘭氏陽性菌：Gram-positive	格蘭仕陰性菌：Gram-negative
Bacillus cereus Bacillussubtillis Corynebacteriumglutamicum Enterococcus faecalis Enterococcus faecalisFSCC 146002 Lactobacilluscasei Listeria monocytogenes Micrococcus luteus Staphylococcus aureus Staphylococcus aureusNBRC13276 Staphylococcus aureusATCC 25923 Staphylococcus epidermidis Staphylococcus epidermidisATCC 14990 Staphylococcus epidermidisFSCC 223011 StreptococcusmutansNCTC 10449 StreptococcusmutansUA 159	Acetobactersp. AcinetobacterbaumanniiATCC 19606 CampylobacterconcisusATCC 33237 Enterobacter cloacaeFSCC145003 Escherichia coli1.1369 Escherichia coliATCC 25922 Escherichia coliBW25113 Escherichia coliK-12 Fusobacteriumnucleatumsubsp.polymorphumJCM 12990 Klebsiella pneumoniaeFSCC167002 Proteusmirablils Pseudomonas aeruginosa Pseudomonas aeruginosaNBRC13275 Pseudomonas aeruginosaATCC 27853 Salmonella enteritidis Salmonella typhimurium Serratia marcescens StenotrophomonasmaltophiliaATCC 51331 Vivrio parahaemolyticus Yersiniaenterocollica