小鼠生殖工程學技術——8胚胎移植入輸卵管
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小鼠生殖工程學技術——8胚胎移植入輸卵管在實驗中，我們通過輸卵管壁將2細胞期胚胎移植入代孕小鼠體內。與傳統胚胎移植的過程相比，更簡易，而且適合沒有經驗的實驗操作員。
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◆材料
1. 假孕第一天的雌性小鼠(這天觀察小鼠陰栓)
2. 微型彈簧剪刀（5mm刀片）
3. 鉗子（Pair of watchmaker's #5 forceps）
4. 動脈夾
5. 傷口縫合器(Autoclip 9mm; Clay Adams 427631) 和clip applicator (Mik-Ron Autoclip Applier; Clay Adams 427630)
→clip applicator
6. 塑料培養皿 (35mm X 10mm Cat.No.430588; CORNING)
7. 用于胚胎的移植和操作的玻璃微管
◆步驟
準備小鼠
1. 麻醉一只雌性小鼠。
2. 常規方法是取出卵巢、輸卵管及部分子宮。
3. 用動脈夾固定附著在卵巢囊上的脂肪
定位輸卵管
如下圖所示，通過切割輸卵管，往切口處插入微管，然后朝輸卵管的壺腹部注入胚胎。
但是，正如我們所看到的輸卵管的圖示(A)，小鼠的輸卵管呈細微而復雜的折疊式結構。而且，微管是從上方插入的，胚胎難以到達輸卵管的壺腹部。
為了簡化此過程，在操作前，可以通過動脈夾來改變輸卵管的定位，如圖(B)。
1. 立體顯微鏡下觀察輸卵管，并使用鉗子的尖端來確認輸卵管傘部和壺腹部的位置，或者改變動脈夾的位置。
2. 通過改變動脈夾和小鼠的位置來定位輸卵管。
注意：因為每只小鼠的輸卵管折疊形狀都不一樣，需要仔細觀察和定位輸卵管才能更容易地進行實驗。 注意：如果你是左撇子，就能輕易地完成定位輸卵管的步驟。
胚胎與玻璃微管的制備
１. 在培養皿上制作一個200μL的 KSOM/AA滴液 (無液體石蠟)，然后在滴液里放入20個胚胎。
2. 制作轉移胚胎的玻璃微管，管內的空氣和溶液交替間隔2-3mm 。然后用玻璃微管吸入10個胚胎。
注意：如上圖所示，當玻璃微管首次插入滴液時，液體石蠟會殘留在滴液的表面。玻璃微管應從另一邊吸入胚胎，以免吸入液體石蠟。
有證據表明，如果輸卵管沾上液體石蠟會對胚胎發育造成不利的影響。
轉移胚胎
１. 使用Pair of watchmaker's #5 forceps和微型彈簧剪刀，解剖傘部和壺腹部之間的輸卵管壁。
2. 將含有胚胎的微管插入輸卵管的切口處，朝壺腹部注入胚胎。
3. 用鉗子固定微管插入的輸卵管的位置。
4. 排出胚胎和2~3個氣泡到壺腹部處。
注意：如果實驗進程順利，你可以通過壺腹部的壁看到氣泡。
注意：如果你無法將胚胎和氣泡排進輸卵管，稍微往后移動玻璃微管，再次嘗試。
5. 將切口處的微管移走。
注意：調整輸卵管的位置和方向后才能轉移胚胎。如果微管平行對齊輸卵管，就能更容易地插入輸卵管內。
6. 把卵巢、輸卵管和子宮放回小鼠的腹部，用傷口縫合器縫合傷口。
7. 重復上述步驟，把剩余的10個胚胎移植到另一只小鼠的輸卵管內。
8. 在37°C 加熱板上保持小鼠的體溫，直到小鼠蘇醒。
參考文獻
【1】 Nakagata N. 1992. Embryo transfer through the wall of the fallopian tube in mice. Exp. Anim. 41: 387-388.
【2】 Nagy A., Gertsenstein M., Vintersten K., and Behringer R. 2003. Manipulating the Mouse Embryo, A
Laboratory Manual (Third edition). Cold Spring Harbor Laboratory Press. ISBN 0-87969-591-9.
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