通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)-PCR試劑/耗材-分子生物學
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| 別名 | 通用RT-PCR試劑盒(M-MLV) 反轉錄試劑盒 |
|---|---|
| 英文名稱 | Universal RT-PCR Kit(M-MLV) |
| 儲存條件 | -20℃ |
| 單位 | 盒 |
本試劑盒適用于各種 RNA制品的反轉錄反應以及隨后的PCR擴增。它采用M-MLV進行反轉錄反應，能夠獲得較長的反轉錄產物。同時，在20ul反轉錄體系和50ul PCR反應體系中，還可以一次性得到足夠量的PCR產物用于后續的克隆實驗。本試劑盒中配制的酶均為進口的酶。RT酶采用進口的M-MLV，所以cDNA更長，基因的信息保留得更完整！反轉錄過程中特異的RNase抑制劑可有效降低由于外源RNase污染而導致實驗失敗的風險。本試劑盒使用方便、快捷，可廣泛用于cDNA克隆及目的基因檢測等分子生物學實驗。
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)產品簡介
莫洛尼鼠白血病病毒反轉錄酶（M-MLV RT）是一種RNA依賴的DNA聚合酶，能使mRNA（>5kb）轉錄為cDNA。M-MLV RT的RNase H活性相對于禽成髓細胞瘤病毒反轉錄酶較弱，更適合用來反轉錄較長的mRNA。M-MLV RT應用于以RNA為模板合成cDNA的第一條鏈。
注意：M-MLV RT的延伸性要低于AMV 反轉錄酶，因此要得到和用AMV 反轉錄酶一樣產量的cDNA需加入更多單位的M-MLV反轉錄酶。
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)使用方法
1）使用方法簡介以用2mg總RNA為例。在無RNase離心管中，加入0.5mg引物至含總RNA的樣品中，總體積不大于15ml。70℃，5分鐘打開模板鏈形成的二級結構。立即放于冰上降溫防止二級結構恢復，隨后短暫離心使液體集中在離心管底。
2）加入以下成分到已退火后的引物–模板混合物中。
注意：不要改變引物的加入比率。
M-MLV 5×Reaction Buffer 5ml
dATP，10mM 1.25ml
dCTP，10mM 1.25ml
dGTP，10mM 1.25ml
dTTP，10mM 1.25ml
Recombinant RNasin Ribonuclease Inhibitor 25 units
M-MLV RT 200 units
無核酸水至最后體積 25ml
3）輕輕混勻離心管，如果使用隨機引物在37℃孵育60分鐘，其他引物則42℃孵育。延伸溫度在37～42℃之間最佳。
4）M-MLV RT 用于合成cDNA的第一鏈。往后的合成則需要根據需要自行設計引物再次合成。
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)Buffer組成
M-MLV RT 5×Reaction Buffer
250mM Tris-HCl（PH 8.3 室溫下）
375mM KCl
15mM MgCl2
50mM DTT
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)來源
大腸桿菌表達純化
通用RT-PCR試劑盒(M-MLV)保存條件
-20℃保存。避免經常凍融。
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