品牌: cobioer
公司: 南京科佰生物科技有限公司
提供商： 科佰生物 服務名稱： WB
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Western Blot檢測：蛋白印跡（Western Blot）是根據抗原抗體的特異性結合檢測復雜樣品中的某種蛋白的方法，用于檢測經電泳或斑點雜交后固定于膜上的蛋白質的檢測。特異、穩定的液態酶標抗體和相應的底物，保證了快速、準確的檢測；而避免了放射性物質的使用，現已成為蛋白分析的一種常規技術，對蛋白進行定性和半定量分析。
科佰生物團隊有豐富的WB經驗，成功完成了各種蛋白的檢測，除了傳統的流程外，公司也掌握了快速轉膜法（一天完成WB），紅外二抗檢測（Oddssey）等技術。
實驗流程：1.蛋白質抽提
實驗對象為組織樣品，取適量（250~500mg）新鮮組織樣品或正確保存的組織樣品，加1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑），勻漿后抽提總蛋白（或核蛋白）。
實驗對象為細胞樣品，每份樣品取1×106～1×107細胞，PBS清洗細胞，去PBS加0.1ml~1ml含蛋白酶抑制劑的總蛋白抽提試劑（或核蛋白抽提試劑）抽提總蛋白（或核蛋白）。
2. 蛋白質定量：按BCA蛋白質定量試劑盒操作說明操作，測定樣品濃度。
3. 變性聚丙烯酰胺不連續凝膠電泳(SDS-PAGE):將準備好的樣品液和預染蛋白marker分別上樣，標準加進第一個孔中，電泳分離蛋白。
4. 蛋白質轉移到PVDF膜,按Bio-Rad蛋白轉移裝置說明組裝濾紙凝膠纖維素夾層，300mA恒流條件下，4°C轉移90分鐘左右。
5. western blot膜的封閉和抗體孵育。
膜在5％脫脂奶粉(磷酸化蛋白用BSA)溶液中室溫孵育1小時以封閉膜上的非特異結合。
封閉過的膜加入一抗4°C孵育過夜，抗原抗體結合。
加入HRP標記的二抗體以結合一抗，室溫孵育膜1小時。
6. western blot結果檢測：化學發光法檢測，膜與化學發光底物孵育，經X膠片曝光顯影。
當加入的二抗選擇外紅熒光二抗時，用Oddssey曝光條帶。
7. western blot數據分析，可定性、半定量分析。
8. 提供實驗報告，包括詳細的實驗方法及免疫印跡實驗結果的相關數據。
樣品要求:
客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品，目的蛋白陽性表達樣品（如果有陽性表達的細胞或組織）， 檢測目的蛋白的一抗（建議由科佰生物代購）。
樣品要求為:
·裂解樣品總蛋白量＞500ug/樣品；
·細胞樣品總蛋白濃度＞1mg/ml；
·組織樣品總蛋白濃度10-15mg/ml。
服務說明:
1. 建議提供目的蛋白陽性表達樣品（純蛋白或有陽性表達的細胞或組織）作為陽性對照 ；
2. 每張膜（小號）可檢測1-8個樣品，大號膜可檢測1-24個樣品；
3. 一抗需在正確條件下保存，避免污染及反復凍融；
4. 如需科佰生物進行數據分析，請另詢價。
提交的產品和資料:
1.曝光結果（膠片和掃描圖）；
2.實驗報告。
訂購方法：1、詢價及訂購請填寫"詢價單"，并發送郵件至sales@cobioer.com2、根據客戶信息，我們會上門取樣品3、如需幫助，請發送郵件至tech@cobioer.com或撥打025-86880024，科佰生物的技術支持將竭誠為您服務。
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