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小鼠生殖工程學(xué)技術(shù)——3小鼠附睪尾部的低溫運(yùn)輸
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◆材料
1、成年的雄性小鼠2、解剖用的剪刀(夏目制造所 小直剪刀Cat.No.B-12)3、解剖用的鉗子(夏目制造所 尖鉗子Cat.No.A-5)4、自動(dòng)施夾鉗(日本Becton, Dickinson and Company Cat.No.427630)5、自動(dòng)縫合器(日本Becton, Dickinson and CompanyCat.No.427631)6、麻醉劑7、加熱盤8、紐扣式溫度記錄儀(KM Laboratories 溫度記錄儀 Thermochron G type)9、0.2ml Ep管(注入凍存液)10、CARD冷藏運(yùn)輸試劑盒(1)棉花(2)紙盒(3)保溫瓶(4)制冷劑(小)(5)制冷劑(大)(6)泡沫箱※ 紐扣式溫度記錄儀,0.2mL EP管(裝入凍存液)和CARD 冷藏運(yùn)輸試劑盒,預(yù)先放進(jìn)4~8℃的冰柜里,使用時(shí)直接從冰柜里取出,并迅速進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
◆方法
單側(cè)附睪尾采集
術(shù)前,用酒精消毒全部解剖工具。1、麻醉一只12周齡以上的雄性小鼠,使其仰臥。2、用酒精棉消毒陰囊附近的位置(消毒后,如陰囊沒有脹大,可能是因?yàn)椴G丸縮入腹腔,只要用手指輕按下腹部,睪丸就會(huì)移回陰囊內(nèi))。3、切開陰囊單側(cè),露出附睪尾。
4、切斷輸精管與附睪體,取出附睪尾(即使不能完全去除尾部的血液與脂肪也不會(huì)影響運(yùn)輸)
【采集的附睪尾和脂肪塊】
※附睪尾內(nèi)部的細(xì)管(附睪管)構(gòu)造盤旋曲折,注意仔細(xì)觀察,不要與其他內(nèi)臟混淆。
要點(diǎn):取出附睪尾時(shí),為了不傷尾部,可按壓著脂肪一起取出。 睪丸移回體內(nèi)時(shí),為不傷睪丸,請(qǐng)按壓著切開的肌層一起移回。
5、用自動(dòng)縫合器,縫合切開的皮層(也可用縫合線)
※如要采集兩個(gè)附睪尾時(shí),也按照3~5步驟進(jìn)行。6、讓小鼠仰臥在加熱盤上,從麻醉到蘇醒期間,保持小鼠的溫度。
※取出單側(cè)附睪尾的小鼠,在術(shù)后1周內(nèi)可以與其他小鼠進(jìn)行交配。
冷藏運(yùn)輸附睪尾
1、從冰柜里取出0.2mL EP管(裝有凍存液),讓附睪尾沉入凍存液里,用封口膜纏繞0.2mL EP管的蓋子。
2、在紙盒內(nèi)放入0.2mL EP管和紐扣式溫度記錄儀,用棉花覆蓋后蓋上蓋子。
3、紙盒放進(jìn)保溫瓶?jī)?nèi)。
4、在保溫瓶?jī)?nèi)放進(jìn)兩個(gè)制冷劑(小)。
5、蓋上保溫瓶蓋。
6、確認(rèn)蓋子蓋緊后,在泡沫箱里鋪上制冷劑(大),把保溫瓶放進(jìn)里面(這時(shí),注意不要顛倒保溫瓶?jī)?nèi)的0.2mL EP管)。接著,在保溫瓶的兩側(cè)及上方,都放上制冷劑(大),蓋上泡沫箱蓋子后,用包裝膠帶牢牢捆扎。7、用快遞運(yùn)輸前,把整個(gè)泡沫箱放進(jìn)冰柜內(nèi)保存。8、快遞(冷藏)運(yùn)輸(最長(zhǎng)可保存72個(gè)小時(shí))

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